宝子们！今天聊个WB实验中90%人踩过的坑——蛋白上样前到底能不能煮样？哪些情况煮了会翻车？赶紧收藏这篇干货，实验成功率飙升💡
❌【这5类样本千万别煮样】
1️⃣ 膜蛋白——煮沸必堵孔！
膜蛋白含有大量疏水结构（比如受体蛋白），高温煮沸会形成多聚体导致泳道堵塞、条带变形甚至完全无信号。
✅正确操作：37℃孵育10-30分钟或50-70℃预实验验证
2️⃣ 热敏感蛋白——高温直接降解！
线粒体蛋白（如COX IV）、溶酶体酶等对温度极其敏感，煮沸会破坏表位结构导致抗体无法识别。
✅正确操作：全程冰浴+37℃低温变性
3️⃣ 核蛋白样本——煮不煮都行！
核蛋白提取时已通过超声等物理破碎，无需二次煮沸即可保持线性结构（亲测有效！）
✅正确操作：离心后直接上样
4️⃣ 长期冻存样本——先看状态再决定！
-80℃保存超半年的样本若出现沉淀/浑浊，需补加还原剂重新煮沸；无明显异常可瞬离后直接上样
⚠️注意：反复冻融的样本煮沸易聚集，建议分装保存！
5️⃣ 预制胶专用样本——浓度过高别硬煮！
预制胶对样本黏稠度敏感，煮沸后蛋白过度浓缩易导致泳道拖尾，建议稀释后瞬离上样
【避坑小贴士】
✨膜蛋白建议用Triton X-100代替SDS裂解
✨热敏感蛋白可选用含尿素的非变性Loading Buffer
✨核蛋白样本加1μl Benzonase酶消化核酸防拖尾